本发明公开了病毒样颗粒内标实时荧光RT-PCR检测新城疫病毒的方法，根据新城疫病毒基因序列，在6997到7092之间的位点设计特异性引物和TaqMan探针；根据扩增目标片段的特点，设计内标探针序列。上述特异性引物的上游引物序列为：tgcagagatc actcacactc at；上述特异性引物的下游引物序列为：gatggaacgc agagtagaaa ag；上述TaqMan；探针的目标探针序列为：FAM-cctgttgcag atgtccggagcac-BHQ1;上述TaqMan探针的内标探针序列为：VIC-gctcattcgg ctcgacgggc aat-BHQ2。本发明的优点在于快速、特异性强、灵敏度高，应用于临床，能在3小时内准确的对新城疫进行诊断，为动物疫病治疗方案的制定提供依据，提高科学养殖水平。