本发明属海洋生物技术领域，具体地说是一种大菱鲆精子高效超低温冷冻保存的方法。将大菱鲆的精液与抗冻液按体积比3:1-4:1的比例混合，混合后经过两步降温处理，一步平衡后投入到液氮（-196℃），分装保存；抗冻液由稀释液、抗冻剂、添加剂三部分组成。本发明的大菱鲆精子高效冷冻保存方法获得的高质量的冻精对于大菱鲆人工繁育、种质保存、遗传多样性及可持续养殖等方面有着重要意义。