本发明公开了一种绵羊肺炎支原体环介导等温扩增检测试剂盒的原料配方及制备、使用方法。其原料配方为：1000~2000μL反应液，100~200μLBstDNA聚合酶，50~100μL阳性对照，50~100μL阴性对照，1mL-2mL液体石蜡，1mL-2mL超纯水；反应液包括内引物混合液、外引物混合液、LAMP反应缓冲液、Mg²⁺及dNTP，五种液体于反应液中体积比为2:2:2.5:2:1。制备方法包括以下内容：第一，最佳反应温度与时间的确定；第二，特异性检测、敏感性检测和临床应用性检测；第三，试剂盒包装。本发明对山羊养殖场绵羊肺炎支原体感染山羊疑似病例病原检测具有快速、简易、准确的特点。