本发明涉及一种荧光定量检测羟基自由基的方法，特别是涉及一种以苯五甲酸为荧光探针的荧光定量检测羟基自由基的方法，具体步骤为：将捕捉剂苯五甲酸加入待测体系中，使其摩尔浓度为羟基自由基产生物摩尔浓度的1倍及1倍以上；检测待测体系荧光强度，由荧光强度计算此时待测体系中羟基自由基的产生量。苯五甲酸苯环结构仅含一个反应位点，与羟基自由基加成后生成唯一荧光性产物—羟基苯五甲酸，使定量检测更准确。本发明可在20～98℃对产生羟基自由基的体系(pH≥5)进行定量检测。本发明操作简单快速、专一性强、灵敏度高。有助于探究纺织化学、环境化学、制浆造纸等产生羟基自由基工艺体系的机理，从而更好地指导生态生产工艺。