本发明公开了一种浒苔蛋白酶的制备方法，该方法包括：选择原料、高压清洗、漏水剪切、添加蛋白酶抑制剂榨汁、加入抽提液和缓冲液放入捣碎机制备粗抽提液、固体硫酸铵离心、乙酸溶液透析脱盐、加入罗氏蛋白酶抑制剂冰浴冷却、加入氯丁橡胶cr322搅拌离心、用碳酸氢钠纯化、n-乙酰-l-半胱氨酸溶液结晶、冷冻离心收集结晶、成品保存。有效保证浒苔蛋白酶活力和纯度。本发明的可广泛应用在洗涤工业、食品工业、纺织工业、皮革工业、纸浆工业、饲料、石油天然气钻井、临床医药、农业、林业、畜牧业等行业。并在的应用中具有减少耗能，减少化学品、快速环保的优良效果。