本发明提供了一种活菌检测预处理装置及活菌检测预处理方法。该预处理装置包括:壳体;设置于该壳体内的光照系统、制冷系统和样品模块;所述光照系统包括光源、散热风扇和散热器;所述制冷系统包括半导体制冷器、散热风扇和散热器;所述样品模块设置于所述光源与半导体制冷器之间;其中,所述样品模块上设置有与样品管相配合的样品管槽,且该样品管槽能使所置入的样品管具有朝向光源的管壁面。本发明还提供了一种活菌检测预处理方法和微生物检测方法。本发明的目的在于提供了一种对PCR及Real time PCR检测方法前的待测样品的预处理装置,并且通过该预处理装置进行的预处理方法,其操作简便,且效果良好。