本发明涉及基于项链状金纳米粒自组装体系的一氧化氮荧光探针的制法，该方法具体包括以下步骤：1)以柠檬酸为稳定剂，采用微波热解法制备荧光金纳米粒；2)通过静电吸附自组装负载在聚丙烯氯化铵纳米纤维上，形成项链状金纳米粒自组装体系；3)测定该体系荧光强度与体系内NO浓度的线性关系，构建出基于此项链状金纳米粒自组装体系的NO荧光探针。与现有技术相比，本发明方法简单，成本较低，制备的探针具有荧光强度高，NO分子可接触位点多，探测敏感性高，对于NO的高效原位探测具有巨大的应用价值。