本发明公开了香鱼假单胞菌荧光定量PCR检测试剂盒及检测方法，该试剂盒包括SYBR Premix Ex Taq^TMII试剂10.0μl，浓度为10μM的上游引物溶液、下游引物溶液各0.8μl；检测方法通过细菌提取、细菌酶解、DNA粗提物制备、DNA粗提物纯化和检测；该检测试剂盒可以灵敏、快速、定量、特异性的检测出早期的香鱼假单胞菌，定性定量灵敏度可以达到10³copies；可以检测水产养殖动物是否感染香鱼假单胞菌，养殖水体环境中香鱼假单胞菌含量，养殖饲料和鲜活饵料是否遭受香鱼假单胞菌污染等。