本发明公开了含有人类骨保护素基因的重组慢病毒载体及其制备方法和应用，制备方法如下：将人类骨保护素基因编码序列区域克隆连接到T载体上；扩增两端含有酶切位点的人类骨保护素基因的编码序列片段连接到pIRES-EGFP载体上，获得OPG-IRES-EGFP载体；扩增出OPG-IRES-EGFP序列，亚克隆到载体pcDNA6.2w上；将pcDNA6.2w上的OPG-IRES-EGFP序列经BP重组到入门载体上，再经LR重组到pLenti6.3/V5载体上，得到Lenti6.3-hOPG-IRES-EGFP。该载体能够实现转染基因在体内持续、稳定的表达，并能用于极难转染的干细胞和原代细胞。