本发明提供一种制备和应用具有特殊功能的高效疏水相互作用色谱(HPHIC)填料的方法。将细胞膜上的两性功能分子胆固醇作为固定相配基，与硅胶基质表面化学修饰获得了仿生的HPHIC填料。该填料装填的HPHIC柱采用盐-水为洗脱体系，可应用于天然蛋白质分离，变性溶菌酶、重组人酪氨酸激酶配体(rhFL)包涵体和重组人干细胞因子(rhSCF)的复性与同时纯化。