本发明公开了一种组织工程皮肤，包括种子细胞和脱细胞异体真皮基质，种子细胞与脱细胞异体真皮基质形成皮肤附属器，种子细胞通过3D打印机按正常皮肤的解剖结构排列平铺打印在脱细胞异体真皮基质正面的相应位置中。本发明还公开了上述组织工程皮肤的制备方法。本发明提供了完善的组织工程皮肤，可以供在手术室内短时间内快速构建组织工程皮肤(完成手术)。同时，由于本发明的组织工程皮肤既有种子细胞，又有真皮基质，而种子细胞为基底层细胞，具有类多能干细胞活性，拥有多能分化功能，按正常皮肤的解剖结构排列打印在相应的位置中，容易形成皮肤附属器，不仅术后愈合率加快，而且有利于恢复皮肤功能。