本发明公开了一种增强MSCs免疫调节功能的临床级别细胞制备方法，适用于骨髓、脂肪、脐带来源的间充质干细胞培养。本发明采用无血清完全培养基进行脐带组织来源的间充质干细胞的培养，应用二次接种的方法对传统方法进行了改进，提高了原代细胞的获得率；同时本发明应用咪唑喹啉R848？1～5μg/mL和重组人干扰素IFN-α-2b？100～200U/mL作为预处理因子，明显地诱导了MSCs高表达和分泌细胞因子VEGF，HGF和PGE-2，使其更好地发挥其免疫调节和促进组织再生的能力，可明显地提高MSCs的增殖能力和抵抗NK细胞杀伤的能力，同时预处理后的MSCs具有增强的抑制淋巴细胞增殖的能力，更好地应用于以T细胞为主的GVHD和其他自身免疫性疾病的治疗。