本发明提供了一种内皮细胞培养基和内皮细胞的培养方法，该内皮细胞培养基包括无血清基础培养基、胰岛素、转铁蛋白、维生素C、牛血清白蛋白、碱性成纤维生长因子、血管内皮生长因子、干细胞生长因子、层粘连蛋白、表皮生长因子、非必须氨基酸和二甲双胍盐酸盐。本发明提供的内皮细胞培养基在上述组分的配伍下能够提高内皮细胞的增殖能力。另外，本发明提供的内皮细胞培养基还能提高内皮细胞的成血管能力。实验结果表明：本发明提供的内皮细胞培养基培养内皮细胞至P10代时，细胞依然生长旺盛；P10代内皮细胞表型CD309和CD31双阳性表达高达97.2％。