一种抗肿瘤药物筛选细胞模型及其应用，属于生物工程技术领域。抗肿瘤药物筛选细胞模型是从胶质母细胞瘤中分离的、定点整合了报告基因的肿瘤干细胞，含有A－B－C－D结构的DNA构建物，其中：A，D为胶质母细胞瘤干细胞分子标记基因启动子及下游序列，B为报告基因序列，C为嘌呤霉素抗性基因puro序列；胶质母细胞瘤干胞分子标记基因是包括Nestin基因；报告基因包括绿色荧光蛋白基因GFP、或红色荧光蛋白基因RFP、及荧光素酶报告基因luciferase。该抗肿瘤药物的细胞模型用于筛选细胞毒性和诱导分化的物质。有益效果在于：1、避免了传统的细胞转基因方法的不利影响，检测结果将能正确反映药物作用效果。2、获得抗肿瘤干细胞的化合物。