本发明公开了一种具有骨向分化和血管发生的组织工程细胞片的制备方法，该方法首先分离骨髓间充质干细胞，然后进行骨髓间充质干细胞传代扩增培养，最后实现间充质干细胞片的培养，得到具有骨向分化和血管发生的组织工程细胞片；本发明通过采用细胞片层技术分离培养BMSCs，收获的BMSCs是含有细胞外基质的完整片状结构，并具有骨向分化和血管发生潜能。由于移植到体内的只有由纯细胞构成的组织，避免了支架等载体的使用以及其所带来的不良反应。且BMSCs细胞片层保留了重要的细胞表面蛋白，如离子通道、连接蛋白等，细胞间可以更好地进行信号传递，保持功能的协调一致。大大提高了细胞的利用率和转移细胞的活性。