本发明涉及一种神经胶质瘤全肿瘤抗原及其制备方法，其制备方法包括以下步骤：获取神经胶质瘤干细胞和神经胶质瘤非干细胞，将两者混合后进行细胞裂解后，离心去上清，即获得神经胶质瘤全肿瘤抗原。采用神经胶质瘤干细胞和神经胶质瘤非干细胞制备的神经胶质瘤全肿瘤抗原较现有神经胶质瘤抗原携带的抗原信息较多较全，因此采用本发明提供的神经胶质瘤全肿瘤抗原所制备的疫苗，不仅能杀死神经胶质瘤干细胞，而且还能够杀死神经胶质瘤肿瘤细胞，杀瘤率较高，且免疫原性较强。