本发明提供了一种构建能分泌表达细胞因子的转基因饲养层细胞的方法，其是将编码至少一种特定细胞因子的基因整合至哺乳动物饲养层细胞的基因组中，随饲养层细胞进行分泌表达。该方法建立的饲养层细胞可以替代培养基中添加的细胞因子，一方面可以大大降低目前干细胞培养中因添加细胞因子造成的高成本，另外可针对不同物种干细胞的特性有针对性地建立表达特定细胞因子的饲养层细胞。本发明提供的方法操作简单，费用低廉，实用性强，可推广应用到各个物种不同类型干细胞的培养。