本发明涉及一种小分子化合物CHIR99021的用途。具体为小分子化合物CHIR99021用于促进胚胎干细胞的自我更新且抑制分化的用途和用于干细胞培养基成分的用途。还保护一种包括小分子化合物CHIR99021的干细胞培养基。单独使用该小分子CHIR99021能很好地维持小鼠胚胎干细胞的干性，并可以增加小鼠胚胎干细胞形成克隆的效率。