本发明提供了一种沃顿胶消化液，包括透明质酸酶和硫酸软骨素ABC酶。采用本发明的沃顿胶消化液联合消化沃顿胶的过程中可克服胰酶和胶原酶长期消化对脐带间充质干细胞的影响，不会额外的造成干细胞的胞膜损伤，处理之后分离得到的干细胞具有更加优良的增殖活性和分化能力。本发明的方法制备得到的脐带间充质干细胞，相比现有采用胰酶和胶原酶消化制备干细胞的方法，从相同的脐带组织中，具有更高的干细胞获取率，并且获得的干细胞具有更高的细胞活性和分化潜能。