本发明涉及医学生物工程技术领域，具体涉及一种树突状细胞疫苗及其制备方法与应用。公开了一种制备针对肝癌干细胞的人树突状细胞(DC)癌症疫苗方法：用锌指核酸酶技术向肝癌细胞株基因组的AAVSl位点中插入Oct4和Sox2基因；采用肿瘤干细胞球体形成法，从修改过的肝癌细胞中富集了类肝癌干细胞；用类肝癌干细胞冻融裂解液刺激自体血分离制备的树突状细胞得负载肝癌干细胞抗原的抗原递呈DC细胞，建立的肝癌干细胞株能高水平地表达肝癌干细胞的分子标记物，显著提升CDl3、CD90和EpCAM等数个肝癌干细胞标记物的表达，特异性强；采用的抗原递呈树突状细胞源自自体血、安全性高，毒副作用小；制备DC细胞癌症疫苗经试用后显著激发肿瘤干细胞特异性细胞毒性效应CTL反应。