本发明公开了肝源性表达NG2的干细胞群(NG2⁺HSC)作为种子细胞在体外3-D培养重建人工肝脏中的应用及方法，具体是将NG2⁺HSC注入全肝去细胞天然生物支架中，然后加入能使NG2⁺HSC重建为人工肝脏的培养基，模拟体内肝组织器官发育生成的微环境体外三维(3-D)培养重建肝脏器官，本发明的培养方法简单，成本低，培养时间短，21天即能形成完成的肝脏器官样轮廓，并且培养获得的人工肝脏器官具有正常肝组织类似的肝小叶结构，同时肝脏功能性蛋白也随着培养时间的延长而增加，并且对硬化肝脏和急性肝衰竭具有修复和功能恢复作用，能作为肝移植供体使用，对临床治疗终末期肝病具有重要意义。