本发明提供一种贴壁密度梯度法联合EGF培养人脐带间充质干细胞的方法，包括如下步骤：UC-MSCs的分离，UC-MSCs的原代培养，UC-MSCs的传代培养与扩增，UC-MSCs的冻存和复苏，以及UC-MSCs细胞免疫表型的检测。本发明采用贴壁密度梯度法，加入4ng/ml表皮生长因子(EGF)，将贴壁培养和消化时间控制相结合，获得纯度和活性较高人脐带间充质干细胞(UC-MSCs)，所述的贴壁密度梯度法联合EGF具有操作简单，快速实用等优点，是一种较为有效的分离纯化UC-MSCs的方法。