本发明涉及一种采用低温处理法提高动物上皮组织来源的表皮干细胞向成牙釉质细胞分化效率的方法。首先将表皮干细胞进行分离培养，得到传代的表皮干细胞，而后利用低温进行处理，处理后再与小鼠胚胎磨牙区牙胚上皮和间充质组织团粒进行重组成嵌合体，最后将嵌合体移植裸鼠肾囊膜中进行诱导培养。第一阶段培养时，CO₂培养箱温度为37℃，CO₂气体浓度为3%～8%，培养时间为1.5～3天。第二阶段培养时，CO₂培养箱温度为24～27℃，CO₂气体浓度为3%～8%，培养时间为2～4天。采用本发明所述的方法，成牙率和成釉率分别至少提高至48%和75%。同时，24～27℃低温诱导操作简便，简易普及。