本发明提供一种密度梯度离心法分离培养人骨髓间充质干细胞(BMSCs)的方法，其包括如下步骤：BMSCs的分离，BMSCs的原代培养，BMSCs的传代培养与扩增，培养细胞表面抗原检测以及生长曲线的测定。本发明采用的密度梯度离心法，用密度为1.077的淋巴细胞分离液来分离BMSCs，经过梯度离心后，将大部分红细胞、脂肪细胞、血小板等去除，获得相对较高纯度的BMSCs细胞，再根据BMSCs贴壁生长的特点，培养2-3天后可见BMSCs基本贴壁，因此在原代培养末期即可以获得均一性较好的BMSCs。本发明具有操作简单，快速实用等优点，是一种较为有效的分离纯化BMSCs的方法。