本发明涉及一种脐带间充质干细胞注射液及其制备方法和应用。所述注射液包括脐带间充质干细胞和混合溶液，所述混合溶液包括：电解质平衡液、羟乙基淀粉、三磷酸腺苷二钠-氯化镁、二甲基亚砜和人血白蛋白。所述制备方法包括：(1)将电解质平衡液、羟乙基淀粉和人血白蛋白充分混匀，过滤除菌；(2)加入脐带间充质干细胞；(3)加入二甲基亚砜；(4)分装冻存，制备完毕。本发明还提供所述注射液在治疗慢性缺血性心脏病的药物方面的应用。本发明的注射液在冻存后复苏效果极佳，可经解冻复苏后直接注射，对于治疗慢性缺血性心脏病具有显著的效果。