本发明公开了一种基于去甲基化促进生殖干细胞自我更新和增殖的载体及其应用，该载体包裹于慢病毒之中，载体上携带有mTet1基因。所述的载体为慢病毒载体，所述的mTet1基因的核苷酸序列如SEQ.ID.NO.1所示。本发明提供的基于去甲基化促进生殖干细胞自我更新和增殖的载体，通过慢病毒表达之后使得mTet1基因整合到奶山羊雄性生殖干细胞的基因组。对稳转的阳性细胞进行培养，表现出漩涡状成簇生长，细胞形态学良好，流式分析细胞增殖周期，发现S期细胞数量增加，表明增殖能力增强，而且转录水平发现雄性生殖干细胞相关基因和自我更新相关基因表达上调，分化相关基因表达下调。