本发明提供了一种抗人大肠癌干细胞相关蛋白LYRM2的单克隆抗体、杂交瘤细胞株及其制备与应用，该抗体为IgG1亚类，由保藏号为CCTCC No：C201212的杂交瘤细胞株D0F8分泌产生。本发明运用发酵工艺表达纯化大量稳定的重组可溶LYRM2融合蛋白，并利用肠激酶酶切和Ni柱分离纯化得到高纯度的LYRM2蛋白。用该蛋白免疫Bal-B/C小鼠，并将骨髓瘤细胞SP2/02Ag14与小鼠脾脏细胞融合获得杂交瘤细胞，筛选融合后的细胞获得了可分泌抗人LYRM2蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞，进而制备了检测大肠癌中LYRM2蛋白的单克隆抗体及，填补了当前尚无抗人LYRM2单克隆抗体的空白，为临床诊断和实验研究提供了重要工具。