本发明涉及一种牙周膜干细胞成骨分化诱导液及方法。所述诱导液由下述含量的下述组分组成：包含基础培养基、维生素C、地塞米松、β-磷酸甘油钠、FBS、IGF-1和BMP-2。所述牙周膜干细胞成骨分化诱导方法，使用上述的成骨分化诱导液进行诱导。本发明提供一种多种诱导因子成骨诱导液，多诱导因子联合应用作用于PDLSCs，能有效的诱导PDLSCs骨向分化。本发明采用的原材料是12-18岁青少年在进行牙齿正畸治疗时需要拔除的第三磨牙，目前基本作为医疗废弃物而扔掉；而本发明将其用于分离培养PDLSCs，进行骨向诱导，有效的实现了医疗废弃物的再利用。