本发明涉及组织工程和医学创面修复技术领域，具体涉及负载羊膜固有干细胞的冻存活性羊膜微粒及其条件培养基与应用。本发明将废弃新鲜羊膜制备成微粒，采用无血清干细胞冻存液冻存在液氮中，在保留羊膜完整基质成份的同时，长期保留羊膜上皮细胞活性，而且可有效避免疾病传播。通过其收集制备的条件培养基能明显促进人表皮细胞、成纤维细胞、内皮细胞的趋化、迁移，动物移植发现活性羊膜微粒可通过调节炎症反应、促进血管化、加快上皮化等多条途径来改善创面愈合，而且羊膜基质可直接作为真皮替代物诱导真皮再生，显著改善创面愈合质量。本发明制备的负载羊膜固有干细胞的冻存活性羊膜微粒及其条件培养基可为创面修复提供一种简单有效的方法。