本发明公开了一种分离提取人皮下脂肪间充质干细胞的方法和提取专用培养基。人的皮下脂肪组织切碎后4℃下离心去除大块脂肪组织，加入混合的I型和II型胶原酶水浴消化。用提取专用培养基重悬后，37℃水浴。过滤收集细胞后加入提取专用培养基进行原代细胞培养5-7天。原代培养后的细胞可以使用普通培养基培养，且可以进行连续培养。提取专用培养基包含低糖达尔伯克氏改良伊格尔培养基培养基，添加一定浓度的胎牛血清、重组成纤维生长因子、表皮生长因子、胰岛素、乙酰半胱氨酸、甲状腺原氨酸。本发明可以从人皮下脂肪中提取大量脂肪来源间充质干细胞，原代培养的细胞内干细胞纯度较高，且干细胞活性较强。