本发明公开了一种长白仔兽骨髓间充质干细胞永生系的建立方法，包括步骤：取长白小公兽的骨髓细胞，培养液培养20-28h后更换新鲜培养液，继续培养，传代至获得细胞形态均一的F3代的长白仔兽bMSCs；利用携带LargeT慢病毒液侵染F3代的长白仔兽bMSCs，细胞筛选，传代至得到稳定表达Egfp的细胞株；将稳定表达Egfp的细胞株，传代50代以上，经细胞生物学分析检测，获得长白仔兽骨髓间充质干细胞永生系。本发明获得了能支持兽bMSCs稳定培养的系统，促使细胞体外快速稳定增殖，并维持原代的生物学特征，证明得到了永生的长白仔兽bMSCs，可以深入研究兽bMSCs生物学性质和应用于药物或疫苗研发。