本发明涉及一种从造血器官、血液中获得干细胞的试剂盒及其应用方法，包括试剂瓶、试剂、盛放试剂瓶的盒体及使用说明书，本发明的试剂盒(1)包括细胞前处理试剂A、细胞负向选择试剂B、细胞正向选择试剂C，分别盛放于细胞前处理试剂瓶(2)、细胞负向选择试剂瓶(3)、细胞正向选择试剂瓶(4)内。本发明的试剂盒还可包括洗脱糖细胞洗涤剂D，盛放于细胞洗涤试剂瓶(5)内，根据本发明获得的干细胞可不带任何外来标记，不仅可应用于实验室研究，也可以直接用于临床使用。本发明的试剂盒使用简便、易操作、可工业化生产，实用有效，可直接用于人类及其他哺乳动物的来源的造血器官、血液标本中的干细胞获得，应用前景广泛。