本发明公开了一种诱导人胚胎干细胞向神经外胚层分化的方法。保持H9细胞以细胞团状态传代，而且细胞团大小均一，能保持其细胞团高密度培养；在此基础上引入SB431542和NOGGIN两种诱导因子，利用化学成分确定的knock out serum replacer(KSR)培养基和N2培养基，在培养不同时间按不同比例配合使用上述培养基；在诱导分化后期的在N2培养基内添加抗坏血酸(维生素C)，在较短的时间内即可诱导HESC定向分化形成表达PAX6蛋白的NE细胞。