本发明涉及喹啉或异喹啉类小分子化合物在人多能干细胞培养及冷冻保存中的应用。其特征在于：在人多能干细胞解离及冷冻保存后，施加适当浓度的喹啉或异喹啉类小分子化合物，可显著促进人多能干细胞存活和克隆形成，并且保持多能干细胞的未分化状态和多能性。该方法适用于人多能干细胞的饲养层和无饲养层的培养方式。本发明方法简单可靠、价格低廉、稳定高效。