本发明属于细胞工程技术领域，具体涉及永生化人软骨终板干细胞系的制备方法及其用途。本发明要解决的技术问题是为构建永生化人软骨终板干细胞系提供一种有效的制备方法。本发明的技术方案是采用慢病毒转染技术构建永生化人软骨终板干细胞系的制备方法，包括如下步骤：a、构建SV40T抗原病毒载体；b、SV40T抗原基因转染人终板干细胞；c、传代并筛选得到永生化软骨终板干细胞。本发明还提供了由上述方法得到的永生化人软骨终板干细胞系在制备骨组织工程材料中的用途。本发明可应用于组织工程骨的制备，为临床上一系列长骨缺损、骨不连病人提供一种价格低廉、成骨能力强的骨组织工程的种子细胞。