本发明提供了一种将人脂肪干细胞分离并诱导成胰岛β细胞的培养基及其使用方法。本发明设计了一套优选的培养基，它无需基因转染，故无基因改变和癌症风险，诱导步骤少，使用简单，诱导时间短，比现有技术减少30%的诱导时间，且安全无毒，诱导成功率高。并且自体脂肪间充质干细胞诱导分化为胰岛素分泌细胞后，自体移植后无排斥，无伦理问题，安全性高，具有广阔的临床应用前景。本发明简单易行，成本低廉，使用效果好。