本发明提供了一种骨髓间充质干细胞在体外向成骨细胞分化的诱导方法及诱导培养基，本发明诱导培养基组成为：地塞米松1×10^-8mol/L，抗坏血酸50μmol/L，β-甘油磷酸钠10mmol/L，溶剂为骨片完全培养基的上清液，其成分为：胎牛血清10%，青霉素100U/mL，链霉素100mg/L，DMEM培养液和F12培养液的混合物以及骨片培养过程中骨细胞分泌的多种生长因子。本发明通过更换细胞培养液和细胞贴壁传代的方法纯化小鼠骨髓间充质干细胞，取获得的第1代细胞进行诱导，以培养72-96小时的骨片完全培养基的上清液为成骨细胞分化诱导剂的溶剂，明显提高了骨髓间充质干细胞的体外成骨分化效率。