本发明公开了一种诱导间充质干细胞向胰岛样细胞分化的培养液及诱导方法和用途，包括尼克酰胺、Conophylline、细胞生长因子、细胞调节素和基础培养基。基础培养基含有97％的高糖DMEM、2％的B-27、1％的N-2。诱导方法包括配制诱导培养液；制备人间充质干细胞；取人间充质干细胞，以1.5-2×10⁵cells/孔接种于6孔超低吸附培养板中，每孔添加3ml诱导培养基，悬浮诱导；每3天换液，于9天时收集细胞上清液，-20度保存。本发明利用尼克酰胺与Conophylline联合诱导人间充质干细胞向胰岛样细胞团分化，缩短诱导周期，使悬浮细胞利于成团，形成类似天然胰岛的细胞团，显著提高诱导分化效率，降低临床应用风险；显著提高诱导细胞胰岛素分泌功能。