本发明涉及生物技术领域，公开了一种脂肪干细胞的提取方法以及制剂和应用。本发明所述提取方法先采集人脂肪组织，用生理盐水清洗；然后机械破碎清洗后的脂肪组织，加入质量终浓度为0.25％的Ⅰ型胶原酶和Ⅱ型胶原酶混合酶液混匀，恒温下摇床培养，培养后离心弃上清液，获得沉淀；最后向沉淀中加入生理盐水清洗、过滤、离心去上清，获得所述脂肪干细胞。本发明调整了复合胶原酶的组合形式及其配比和用量，同时以生理盐水作为整个提取方案中的辅助试剂，从脂肪组织的清洗到最终的脂肪干细胞的获得整体进行了工艺优化，使得最终提取的脂肪干细胞数量高、存活率高、活性高，成本较低，能够广泛用于脂肪干细胞制剂的制备中以及整形美容中。