本发明涉及表达α-gal表位的卵巢癌干细胞疫苗及其制备方法。具体地，提供了一种能够表达α-gal表位的慢病毒表达载体、包含该表达载体的卵巢癌细胞株及其制备方法、表达α-gal表位的卵巢癌干细胞疫苗，以及上述表达载体、卵巢癌细胞株和卵巢癌干细胞疫苗的用途。本发明应用慢病毒载体向卵巢癌细胞SKOV3中引入外源基因兽的α(1,3)GT，可使SKOV3细胞表达α(1,3)GT，并且感染后的细胞传代10代以上或是冻存复苏后仍可稳定表达，因而其在卵巢癌干细胞疫苗的制备方面具备广阔的应用前景。