本发明提供一种由多能干细胞制备可用于药物代谢及毒性试验的功能性肝细胞的方法。所述方法是使用多能干细胞制备高功能性肝细胞的方法，其通过包括工序（A）、（B）的方法，由多能干细胞得到源自多能干细胞的原始内胚层；通过包括工序（C）的方法，由源自多能干细胞的原始内胚层得到肝前体细胞；通过包括工序（D）的方法，由肝前体细胞得到高功能性肝细胞。所述工序（A）是在无血清且无饲养层的环境下进行培养的工序；所述工序（B）是在白蛋白及至少一种细胞因子的存在下进行培养的工序；所述工序（C）是在SHH或SHH激动剂，及至少一种细胞因子的存在下进行培养的工序；所述工序（D）是在至少一种细胞因子的存在下进行培养使其成熟的工序。