本发明提供了一种无CO₂条件下诱导间充质干细胞分化为成骨细胞的培养方法，所述方法包括：将第3代的人骨髓间充质干细胞，在5％CO₂、37℃条件下培养过夜；待细胞完全贴壁并生长到大约80％融合时，更换诱导培养基，在无CO₂、37℃条件下培养14～21天，获得成骨细胞；所述诱导培养基由基础培养基添加胎牛血清、青霉素、链霉素、地塞米松、β-甘油磷酸钠和维生素C制成，所述基础培养基按如下终浓度组成配制：碳酸氢钠0.41g/L；十二水合磷酸氢二钠1.5g/L；磷酸二氢钾0.07g/L；氯化钠8.17g/L；溶剂为不含碳酸氢钠的L-DMEM细胞培养基。使用本发明提供的新型培养基配方，能正常诱导间充质干细胞成骨分化，且分化效果良好，既节省了设备耗费，又适用于无CO₂条件下的细胞培养和诱导分化研究。