一种无载体骨髓间充质干细胞膜片的制备方法。首先用贴壁法培养骨髓间充质干细胞于培养皿中，细胞融合后继续培养7天以上，磷酸盐缓冲液(PBS)或D-Hank’s液冲洗两次，将浓度范围在0.01％～0.004％之间的乙二胺四乙酸(EDTA)100μL加入皿中，细胞膜片逐渐从周围向中央脱离培养皿，完全脱离后，吸除EDTA液，培基轻轻冲洗两次上述膜片后，再次加入培基备用。相比以往有载体的细胞膜片，本发明制备的膜片细胞密度大；操作方法简单、经济；膜片上的细胞可轻易通过显微镜观察；植入体内避免了载体代谢所产生的不良作用；膜片脱离后经胰酶消化、培养，细胞增殖能力、形态及活性无明显改变。