本发明涉及一种简易原代角膜缘干细胞分离和体外培养试剂盒及方法。所述简易原代角膜缘干细胞分离和体外培养试剂盒包括：组织清洗液、冷消化液、热消化液和培养液。所述简易原代角膜缘干细胞分离和体外培养方法包括下述步骤：角膜缘组织提取、消化、体外培养。使用本发明所述的简易原代角膜缘干细胞分离和体外培养试剂盒及方法进行角膜缘干细胞分离和体外培养，操作简单，干细胞得率高，所得原代干细胞损伤少，增值能力强，体外培养成功率高，重现性好。