本发明涉及一种人的脐带血造血干细胞库的分离及建库方法，方案包括以下步骤：一：脐血加入HES,混匀，静置于4℃冰箱10min后，40g离心；二：将上层液体转移至100ml转移袋1内，离心，将上层血浆转移到原始袋子内备用；三：再将原始袋40g离心5min，上清转移至转移袋1内备用；四：将转移袋1以600g、10min离心，取下层干细胞悬液20-40ml备用；五：将步骤四混匀的脐血干细胞悬液转移到冻存袋中；六：将右旋糖酐和二甲基亚砜（DMSO）以1：1比例混合，在4℃条件下预冷15min为冻存液备用；七：冻存液混匀，使DMSO终浓度为10%；八：使用程序降温仪降温，放入液氮中冻存，本发明使得造血干细胞的分离过程更加简洁方便，分离成本低，分离效率高，最大程度地避免了微生物污染。