本发明涉及细胞工程技术领域，具体为一种从人脂肪组织中分离人脂肪干细胞的方法。本发明通过在生理盐水中加入少量的低分子肝素钙，以此作为清洗液清洗人脂肪组织，可很好的去除人脂肪组织中残留的红细胞等杂质，从而可分离出纯度更高的人脂肪干细胞，杂细胞含量显著减少，有利于人脂肪干细胞的分化诱导，并且可减少Ⅰ型胶原酶、胰蛋白酶及无血清培养基的消耗量，降低工艺成本。此外，以150r/min的速度离心消化人脂肪组织1h，可得到活性明显较好的人脂肪干细胞。