本发明公开了一种脂肪间充质干细胞大规模培养方法，选择非酶消化法(TrypLE)收集贴壁的脂肪间充质干细胞，使用最低的TrypLE用量，最大程度减少细胞消化过程中对细胞的损伤，并选择1.3×10⁴/cm²最佳接种密度培养细胞，使用无血清培养基(UltraCULTURE MEDIUM)，并在培养基中加入合适浓度的EGF,在φ15cm的培养皿中进行大规模的培养。进而将脂肪间充质干细胞的传代次数提高至15代以上仍然能保持原来的干性。从而大大满足间充质干细胞在科学研究与应用上的需求。