本发明涉及干细胞领域，公开了一种制备干细胞外泌体冻干粉的方法，尤其是一种制备人羊膜间充质干细胞外泌体冻干粉的方法。本发明所述制备人羊膜间充质干细胞外泌体冻干粉的方法，以海藻糖作冷冻保护剂与人羊膜间充质干细胞外泌体混合，滤膜过滤除菌，先经超低温预冻后再在一定真空度下低温冷冻。本发明所述制备方法操作简单、安全有效。实验表明，与常规冻干粉制备方法相比，本发明所述制备人羊膜间充质干细胞外泌体冻干粉的方法能很好保持人羊膜间充质干细胞外泌体的形态和活性，适用于冻存人羊膜间充质干细胞外泌体的长期保存及应用。