本发明提供一种增强体外培养间充质干细胞生物抗氧化功能的细胞外基质生物材料、制备方法及其应用，该细胞外基质生物材料的制备步骤如下：脐带间充质干细胞培养在完全培养基中，密度≥90%时，加入完全培养液培养7-10天，每3天换液一次，之后加入脱细胞液，构建成细胞外基质生物材料。本发明的细胞外基质生物材料能够增强体外培养间充质干细胞生物抗氧化功能。