本发明公开了一种人脐带间充质干细胞培养上清活性因子及细胞裂解液的制备与应用，用常规人脐带间充质干细胞培养基培养传代人脐带间充质干细胞，收集低传代的人脐带间充质干细胞培养上清及细胞裂解液，将所收集的上清液及细胞裂解液制备成冻干粉。本发明所制备的冻干粉有效地保存了人间充质干细胞培养上清中的各种具有生物活性的细胞因子混合物，各种细胞因子混合物以冻干粉形式保存，可以有效地解决上清保存期有限这一瓶颈，为人间充质干细胞培养上清的产业化应用奠定了基础。